In this study the quality of Croatian coldblooded mare’s milk during six months lactation period was investigated. Samples of milk were collected throughout six month’s lactation, from 22 mares and included three consecutive lactations. Physicochemical properties (pH, °SH, density) and chemical composition of raw mare milk have been studied. Fat, lactose, protein and solid non fat contents were analysed by infrared spectrophotometry and by conventional methods. Somatic cell count and microbiological parametres such as the total bacterial count, Enterobacteriaceae, coagulase positive staphylococci as well as presence of pathogens, Salmonella species and Listeria monocytogenes were also researched. Results are presented as comparison of standard and instrumental methods for chemical analysis (fat, protein, solid non fat, lactose). The mean values are presented as trends during lactation. Results were analysed by Stata 10.0. For results obtained by using different methods there were significant differences between methods for milk fat on 10th day, lactose content on 10th and 60th day, and total solids non fat on 60th day of lactation. Values of milk fat, protein, lactose and solids non fat obtained on the 40th, 60th, 120th and 180th days of lactation by IR spectrometry were compared with the value obtained on the 10th day of lactation by the same method (IR spectrometry). Milk of the Croatian coldblooded mares showed stabile chemical composition for all ingredients except lactose (p=0.0001), and high microbiological quality throughout the lactation period.; U ovom je radu istražena kvaliteta mlijeka hrvatskih hladnokrvnih kobila tijekom šestmjesečne laktacije. Uzorci mlijeka prikupljeni su od 22 kobile kroz tri uzastopne laktacije. Proučavane su fizikalno-kemijske osobine (pH, SH, gustoća) i kemijski sastav sirovog kobiljeg mlijeka. Mliječna mast, laktoza, bjelančevine i bezmasna suha tvar analizirani su infracrvenom spektrofotometrijom i konvencionalnim metodama. Utvrđen je broj somatskih stanica te ukupni broj bakterija. Od mikrobioloških parametara pretražene su Enterobacteriaceae, koagulazni pozitivni stafilokoki i utvrđeno je odsustvo patogena (Salmonella vrste i Listeria monocytogenes). Rezultati su prikazani kao usporedba standardnih i instrumentalnih metoda za kemijske analize (masti, bjelančevine, bezmasna suha tvar, laktoza). Srednje vrijednosti prikazane su kao trendovi tijekom laktacije. Rezultati su statistički analizirani pomoću programa Stata 10.0. Za rezultate dobivene primjenom različitih metoda zabilježene su statistički značajne razlike između metoda u udjelu mliječne masti 10. dana laktacije, sadržaj laktoze 10. i 60. dana te ukupne suhe tvari 60. dana laktacije. Vrijednosti mliječne masti, bjelančevina, laktoze i bezmasne suhe tvari dobivene 40., 60., 120. i 180. dana laktacije IR spektrometrijom uspoređene su s vrijednošću dobivenom 10. dana laktacijeistom metodom (IR spektrometrija). Mlijeko hrvatskih hladnokrvnih kobila pokazalo je stabilan kemijski sastav za sve sastojke osim laktoze (p=0.0001) i visoku mikrobiološku kvalitetu tijekom cijelog laktacijskog razdoblja.